【儀器信息網(wǎng) 行業(yè)應(yīng)用】本實驗成功建立了基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS） 的尿中有機酸高靈敏度檢測方法，依托東西分析GC-MS 3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀的高性能四極桿質(zhì)量分析器，實現(xiàn)了對復(fù)雜生物樣本中痕量代謝標(biāo)志物的精準(zhǔn)定性與定量分析。其出色的線性關(guān)系（R2>0.997）與多代謝通路覆蓋性，使其在臨床診斷、代謝組學(xué)研究及新生兒篩查等領(lǐng)域具備重要應(yīng)用潛力，可供相關(guān)人員參考。

　　PART ONE實驗部分

　　儀器設(shè)備

　　GC-MS3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀

　　有機酸標(biāo)樣，分析天平、渦旋混合器、離心機、氮吹儀、烘箱、冰箱

　　移液槍、精密PH試紙、容量瓶、具塞玻璃試管等。

　　儀器條件

　　色譜條件：

　　Equity-5（30m×0.25mm×0.25μm)石英毛細管柱，柱流量:1mL/min，分流進樣，分流比：40:1，進樣量：1uL，進樣口：260℃，柱溫：80℃保持1min，然后以5℃/min升至270℃,保持2min。

　　質(zhì)譜條件：

　　EI源，電子能量:70eV，離子源:200℃，接口:270℃，掃描方式：全掃描定性，掃描范圍：50u500u，溶劑峰時間：5min，電子倍增器高壓：700 V。

　　樣品前處理

　　取約20mL尿樣于50mL塑料離心試管中，置于離心機中離心約5min，移取2ml澄清尿樣于10mL的玻璃具塞試管中，加入50uL 4000mg/L的十七烷酸內(nèi)標(biāo)物， 加入1mL 5%鹽酸羥胺水溶液，渦旋混勻，室溫下進行肟化反應(yīng)60min；肟化反應(yīng)完成后加入一定量的鹽酸調(diào)節(jié)PH值為1，加入約1g氯化鈉渦旋使水層飽和，加入3mL乙酸乙酯渦旋提取，提取兩次，靜置分層后將提取液合并于同一玻璃具塞試管中（共準(zhǔn)確移取出5mL提取液），然后于氮吹儀中50℃慢慢吹干，吹干后加入200uL衍生化試劑（BSTFA+TMCS 99:1），渦旋混合，然后放置于烘箱中于80℃衍生化反應(yīng)30min，反應(yīng)完成后將其轉(zhuǎn)移至2mL小樣品瓶中，然后取1uL進GC-MS分析。

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