【儀器網(wǎng)  專題推薦】為規(guī)范化尼卡巴嗪在養(yǎng)殖雞群中的藥物治療，今年我國(guó)開(kāi)始生效實(shí)施的GB31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥zui大殘留限量》中明文規(guī)定了DNC在肉食雞不同組織中的zui大殘留限量。

　　此文論述了怎樣把4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)從樣品基質(zhì)中分離提取出來(lái)，并經(jīng)由凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢驗(yàn)的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB29690-2013，為檢驗(yàn)人員和相關(guān)領(lǐng)域科學(xué)研究人員給予一定的借鑒。

　　檢測(cè)項(xiàng)目：4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)

　　應(yīng)用范圍：雞肌肉/雞蛋

　　液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

　　方法原理：試料中殘留的4,4’-二硝基均二苯脲，用乙腈提取，正己烷除脂，75 %甲醇水溶液萃取，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

　　前處理儀器：

　　分析天平(感量0.00001 g和0.01 g);渦旋振蕩器;離心機(jī);氮吹儀;離心管(50 mL);濾膜(0.2 μm)。

　　檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源

　　試樣制備與保存

　　1.雞蛋

　　取適量新鮮或冷藏的kong白或供試雞蛋，去殼，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

　　取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，作為kong白試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為kong白添加試料。

　　2.雞肌肉

　　取適量新鮮或冷凍的kong白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

　　取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，作為kong白試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為kong白添加試料。

　　前處理方法

　　提取與凈化

　　稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，添加10 μg/mL 4,4’-二硝基均二苯脲-D8標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，加無(wú)水硫酸鈉2 g，乙腈8 mL，渦旋0.5 min，超聲5 min，5000 r/min離心10 min，取上清液，于40 ℃氮?dú)獯蹈?，?5 %甲醇水溶液飽和的正己烷1 mL，渦旋10 s，再加75 %甲醇水溶液1.0 mL，充分渦旋混合，于40 ℃水浴中靜置5 min，2000 r/min離心5 min，取下層清液，濾膜過(guò)濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

　　國(guó)標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)

　　1.DNC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個(gè)月;DNC-D8標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個(gè)月。

　　2.前處理過(guò)程中使用乙腈提取目標(biāo)化合物，無(wú)水硫酸鈉除水，正己烷除脂。

　　3.前處理過(guò)程中注意控制水浴溫度不超過(guò)40 ℃，防止目標(biāo)化合物降解。

　　4.上清液濃縮后，加入正己烷和定容液，需要充分渦旋混合進(jìn)行液液分配萃取，保證除脂效果;水浴靜置過(guò)程中觀察分層情況，可以適當(dāng)延長(zhǎng)靜置時(shí)間，保證水相與有機(jī)相分離完全。

　　5.同位素內(nèi)標(biāo)加入量決定zui終定容后的理論上機(jī)濃度，務(wù)必與配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線中各點(diǎn)同位素的濃度相一致，才能正確校正回收率。

　　6.液質(zhì)聯(lián)用儀負(fù)離子掃描檢測(cè)，為保證檢測(cè)靈敏度，建議正負(fù)離子掃描分開(kāi)儀器進(jìn)行。

　　參考文獻(xiàn)

　　GB 29690-2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中尼卡巴嗪殘留標(biāo)志物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

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